Техника выполнения мазка и толстой капли крови

Техника выполнения мазка и толстой капли крови

Приготовление мазка крови и толстой капли

Приготовление мазка крови и толстой капли для диагностики малярии.

  1. Перед манипуляцией наденьте перчатки.
  2. Подготовьте необходимое оборудование и инструментарий:
  • Скарификатор одноразового использования.
  • 70% раствор этилового спирта.
  • Ватные шарики.
  • Предметное стекло.
  • Предметное стекло с шлифованной краем.
  • Чашку Петри.
  • Стерильный лоток.
  • Лоток для отработанного материала.
  • Сухое мыло.
  • Марлевую салфетку.

Инструментарий и материал должны быть стерильными. Предметное стекло — чистое, сухое, обезжиренное.

3. Подготовка пациента.

  • Предложите пациенту сесть удобно на стул.
  • Объясните ему суть манипуляции.
  • Выясните, какая рука у пациента нерабочая.
  • Помассируйте безымянный палец.
  • Обработайте кожу ногтевой фаланги ватным шариком, смоченным 70% этиловым спиртом по всем правилам и осушите вторым (сухим) ватным шариком.
  • Соблюдайте правила этики и деонтологии при общении с пациентом.

4. Приготовление мазка крови.

  • Сделайте прокол кожи скарификатором.
  • Первую каплю снимите сухим ватным шариком.
  • Прикоснитесь нижней поверхностью предметного стекла ко второй капле на пальце на расстоянии 1-1.5 см от края стекла.
  • Переверните стекло каплей вверх и возьмите в левую руку боковые ребра стекла. Капля располагается сверху и справа. Диаметр капли на стекле должен быть 2-3 мм.
  • Правой рукой установите стекло с шлифованной краем слева от капли под углом 450 с наклоном в сторону капли. Стекло с шлифованным краем должно быть немного уже предметного стекла с каплей крови. Продвигайте шлифованный край вправо до соприкосновения с каплей и подождите, пока кровь растечется по краю шлифованного стекла.
  • Не надавливая, быстрым равномерным движением проведите стеклом с шлифованной краем по предметному стеклу, пока капля не будет исчерпана. Мазок должен быть тонким и равномерным, иметь светло-розовую окраску, просвечивать, занимать ½ — ¾ стекла и заканчиваться щёточкой
  • Если крови выделилось недостаточно, предложите пациенту опустить руку вниз — выжимать каплю крови нельзя!
  • Не прикасайтесь предметным стеклом к коже!

5. Приготовление «толстой капли».

  • На предметное стекло нанесите 2-3 капли крови на небольшом расстоянии друг от друга.
  • Стеклянной палочкой или углом другого предметного стекла смешайте их. Смешивайте легко, чтобы образовалась пятно диаметром 1,5 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, иначе при высыхании образуется просто корка, которая отвалится.

6. Оформите сопроводительную документацию по известным Вам правилам и требованиям.

7. Транспортировка в лабораторию.

  • Подсушите мазок и толстую каплю на воздухе. На поверхности стекла ближе к началу мазка напишите номер, совпадающий с номером на направлении.
  • Изготовленные препараты уложите в чашку Петри и в таком виде транспортируйте в лабораторию.

8. Поместите использованное оборудование в дезинфицирующий раствор.

9. Проведите обеззараживание перчаток.

Техника забора крови и приготовления мазков для исследования на малярию.

Достоверное установление диагноза малярии осуществляется исследованием препаратов толстой капли крови и тонкого мазка, и обнаружением в них малярийных паразитов.

Для приготовления препаратов, кровь обычно берут из 4-го пальца левой руки (меньше подвергающегося загрязнению). Концевую фалангу 4-го пальца предварительно протирают кусочком марли или ваты, пропитанной спиртом, после чего спирту дают испариться с поверхности кожи. Укол наносят копьём на глубину 2-3 мм, в зависимости от толщины кожи.

Выступившую на месте прокола первую каплю крови снимают кусочком сухой ваты, дают появиться второй капле, из которой приготовляют препарат.

Предметные стекла должны быть тщательно обезжирены. Для этого их кипятят в мыльном растворе, затем промывают в мыльном растворе. Затем промывают водопроводной и дистиллированной водой и высушивают спиртом.

Приготовление толстой капли.

В капле крови, выступившей из укола, осторожно прикасаются по­верхностью предметного отекла, после чего легким круговым движением, распределяется кровь на большой поверхности, для того, чтобы слой крови не был чересчур толстым (величина капли как 2ух-копевчная монета).

Обычно на одно стекло берут 2 капли, на некотором расстоянии друг от друга, надпись делается восковым карандашом. Капле дают высохнуть на воздухе без подогревания в горизонтальном положении.

Приготовление тонкого мазка

На поверхность предметного стекла на средней линии, ближе к од­ному концу стекла наносят маленькую, каплю крови. Стекло, (каплей вверх и направо) прижимают к горизонтальной поверхности, стола, двумя пальцами правой руки (придерживать отекло следует за ребро). Правой рукой берут шлифованное стекло (край шлифованного стекла должен быть уже предметного), которое устанавливается по середине предметного стекла перед каплей под углом 45°.

Если стекло наклонять под меньшим углом, получится слишком тонкий мазок, а если шлифованное стекло наклонять под большим градусом — мазок будет очень толстым. Затем шлифованное стекло при том же накло­не подводиться к капле до соприкосновения с ней. Капля растекается в остром углу между стеклами;

После того, как кровь распределится ровной полоской между предмет­ным стеклом и краем шлифованного, стекла, последнее легким и быстрым движением продвигается по предметному стеклу в обратном направлении, т.е. справа налево, и кровь, следуя за шлифованным стеклом, тонким слоем равномерно распределяется по поверхности предметного стекла.

После того, как кровь высохнет, у одного края мазка иглой, углом предметного стекла или простым карандашом делают надпись (фамилия, дата, номер карточки и пр). Мазки высушиваются на воздухе (избегать подогревания, не допускать мух).

Высохшие на воздухе мазки, погружают для фиксации в широкогорлую банку с фиксирующей жидкостью (метиленовый алкоголь) на 3 мин или в смеси из равных частей спирта и эфира на 20-30 минут.

Приготовление препарата «толстая капля»

Показания: подозрение на брюшной тиф, вирусные гепатиты, ВИЧ-инфекцию и другие инфекционные заболевания.

1.Центрифужные пробирки в штативе.

2.Инъекционную иглу с широким просветом.

3.Стерильные марлевые шарики, салфетки, бинт.

6. Стерильный лоток

7. Флакон с 70% спиртом

8. Венозный жгут

9. Клеёнчатую подушку, обёрнутую пелёнкой.

10.Ёмкость с дезинфицирующим раствором.

11.Лоток для использованного материала.

1.Установить доверительные отношения с пациентом.

2.Объяснить пациенту цель и ход процедуры, получить согласие.

3.Помочь пациенту занять удобное положение (сидя или лёжа).

4.Под локоть пациента подложить клеёнчатую подушку, обёрнутую стерильной салфеткой или пелёнкой.

1.Обработать руки на гигиеническом уровне, надеть стерильные перчатки.

2.Подготовить стерильный лоток со стерильной иглой для венепункции и стерильной салфеткой, штатив с центрифужными пробирками.

3.Осмотреть и пропальпировать вену.

4.Исследовать пульс на лучевой артерии.

5.Наложить жгут на плечо пациента, обёрнутое стерильной пелёнкой.

6.Повторно исследовать пульс.

7.Попросить пациента работать кулаком.

8.Дважды обработать кожу внутренней поверхности локтевого сгиба спиртом в направлении от периферии к центру (сначала большую поверхность, затем только место венепункции).

9.Ниже места предстоящей венепункции положить стерильную марлевую салфетку.

10.В правую руку взять иглу для венепункции, попросить пациента зажать кулак.

11.Большим пальцем левой руки зафиксировать вену, правой рукой выполнить венепункцию, левой рукой подставить под канюлю иглы пробирку и набрать необходимое количество крови.

12. Поставить пробирку в штатив.

13. Попросить пациента разжать кулак, снять жгут и приложив к месту венепункции стерильный марлевый шарик, смоченный спиртом, извлечь иглу.

14.Попросить пациента согнуть руку в локтевом суставе или наложить давящую повязку.

1.Весь использованный инструментарий подвергнуть дезинфекции.

3.Вымыть и высушить руки.

4.Оформить направление в лабораторию. Доставить пробирку с кровью в лабораторию.

Возможные осложнения: гематома, инфицирование.

1.В дальнейшем, кровь

центрифугируется, из неё готовится

сыворотка и проводится реакция агглютинации с готовыми диагностикумами различных заболеваний.

2. Недостаток метода в том, что антитела появляются на 5-7 день болезни, преимущества — точный и используется для контроля за эффективностью лечения.

3.При заборе крови на ВИЧ – инфекцию используется шприц- контейнер.

– выявление специфических антител к возбудителю заболевания или антигенов микроорганизма .

-поинтересоваться у пациента его самочувствием, успокоить, если он испытывает страх перед манипуляцией.

-рассказать пациенту, для какого исследования проводится забор крови.

Читайте также:  Назовите возбудителя вич инфекции

-объяснить пациенту, что при выполнении процедуры в другом положении возможно осложнение – обморок.

-пояснить, что данное положение руки облегчит прокалывание вены.

-объяснить, что это необходимо для выбора наилучшего места для венепункции.

-пояснить, что это для контроля правильности наложения жгута.

-объяснить пациенту, что это способствует наполнению вены и облегчит введение иглы.

-объяснить пациенту, что это снизит риск заноса инфекции.

-предупредить пациента об уколе и попросить его отвернуться при боязни вида крови и сообщить медсестре о появлении головокружения, тошноты и других симптомов.

-наблюдать за реакцией пациента во время забора крови.

-спросить пациента о самочувствии.

-пояснить, что давящая повязка уменьшит кровопотерю из вены и снизит риск образования гематомы.

Приготовление мазков крови, толстой капли и их окраска

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Предметные стекла простые и шлифованные.
  2. Покровные стекла.
  3. Лоток эмалированный с мостиком для препаратов.
  4. Промывалка.
  5. Мерные цилиндры емкостью 100 мл.
  6. Пинцеты Корне.
  7. Песочные часы.
  8. Пипетки градуированные на 1, 2, 5 и 10 мл.
  9. Краска Романовского.
  10. Азур.
  11. Эозин.
  12. Краска Май-Грюнвальда.
  13. Краска Лейшмана.
  14. Метиловый спирт.
  15. Этиловый 96° спирт.
  16. Эфир.
  17. Двууглекислый натрий.
  18. Ледяная уксусная кислота.
  19. Дистиллированная вода.

Подготовка предметных стекол для приготовления мазков крови и толстой капли

Качество препаратов крови зависит от чистоты предметных стекол, поэтому новые и бывшие в употреблении стекла подвергают специальной обработке. Для этого с них предварительно удаляют иммерсионное масло кусочком ватки, смоченной бензином или эфиром и помещают на 30 минут в кастрюлю с кипящим мыльным раствором. Многократно промывают водопроводной и дистиллированной водой и помещают в смесь, состоящую из равных частей 96° спирта и эфира. Подготовленные предметные стекла извлекают из смеси с помощью пинцета, вытирают тряпочкой без ворса и, не прикасаясь к ним руками, во избежание загрязнения их поверхности, складывают в коробки, чтобы предохранить от пыли.

Мазки крови приготовляют на чистых предметных стеклах, пользуясь шлифованными предметными или покровными стеклами, чтобы край этих стекол был уже поверхности предметного стекла, на котором готовят мазки, углы стекол иногда надламывают или надпиливают.

Приготовление мазков крови

Прием 1. Предметное стекло захватывают за длинные ребра большим и указательным пальцами правой руки и прикасаются противоположным концом стекла к свежевыступившей капле крови на расстоянии 1-1,5 см от края стекла.

Прием 2. (рис. 29, 1). Предметное стекло располагают между большим пальцем левой руки с одной стороны и указательным и средним — с другой так, чтобы капля крови оказалась сверху и справа.

Прием 3 (рис. 29, 2). Шлифованное предметное или покровное стекло располагают слева и от капли под углом в 45°, при этом его держат большим и указательным пальцами правой руки так, чтобы кончики пальцев касались его длинных ребер.

Прием 4 (рис. 29, 3). Шлифованное предметное или покровное стекло продвигают вправо до соприкосновения с каплей крови и тем самым способствуют распределению крови между стеклами. Когда вся кровь распределится между стеклами (рис. 29, 4), достаточно быстро, спокойно и не надавливая продвигают стекло влево до тех пор, пока капля крови не будет исчерпана (рис. 29, 5, 6). Правильно сделанный мазок равномерной толщины, желтоватого цвета, просвечивает и на конце заканчивается щеточкой; он занимает не более 3/4 и не менее 1/2 длины предметного стекла. Это достигается распределением капли крови, размер которой в диаметре 2-3 мм.

Приготовленный мазок подсушивают на воздухе, после чего на его поверхности углом предметного стекла или грифельным карандашом надписывают фамилию больного. Из крови каждого больного готовят не менее двух мазков.

Приготовление толстой капли

К свежевыступившей капле крови прикасаются предметным стеклом три раза подряд, причем так, чтобы каждая капля отстояла на некотором расстоянии от другой. Углом чистого предметного стекла расширяют капли. Затем препарат подсушивают на воздухе в течение 1-2 часов и маркируют его карандашом по стеклу или специальными чернилами.

Окраска и фиксация мазков крови

До окраски мазки крови необходимо зафиксировать: 1) метиловым алкоголем в течение 3 минут, 2) абсолютным этиловым спиртом — 5 минут, 3) чистым ацетоном — 5 минут, 4) смесью Никифорова (равные объемы 96° этилового сппрта и эфира) — 10-15 минут или 5) фиксатором Май-Грюнвальда в течение 3 минут.

Фиксацию препаратов крови производят следующим образом. В широкогорлую банку с притертой пробкой, в которую налит один из фиксаторов, устанавливают предметные стекла, сложенные попарно мазками наружу (рис. 30). При большом количестве мазков крови каждую пару предметных стекол захватывают кусочками разрезанной по длиннику полой резиновой трубки, что предотвращает соприкосновение мазков друг с другом. По истечении времени фиксации предметные стекла захватывают пинцетом Корне, располагают на мостике мазками кверху на небольшом расстоянии друг от друга. Мостик монтируют из двух одинакового диаметра и длины трубок или пипеток, которые соединяют между собой резиновой трубкой (расстояние между параллельно расположенными стеклянными трубками должно быть 5-6 см).

Для окрашивания фиксированных препаратов крови применяется краска Романовского, которая готовится следующим образом: 3,8 г сухой краски растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта. Оставляют на несколько дней и периодически взбалтывают, после чего прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3-5 дней при частом взбалтывании. В работе применяют краску Романовского, имеющуюся в продаже, которую разводят на дистиллированной нейтральной воде. Так как дистиллированная вода не всегда бывает нейтральной, ее реакцию проверяют с помощью индикаторной бумаги.

Для получения лучшей окраски пользуются буферными растворами.

Для нейтрализации воду щелочной реакции подкисляют 1% раствором уксусной кислоты. Дистиллированную воду кислой реакции нейтрализуют 1% раствором двууглекислого натрия. Результаты нейтрализации устанавливают с помощью индикаторной бумаги.

Титр краски Романовского (количество капель основного раствора краски на 1 мл дистиллированной воды) устанавливают путем окрашивания мазков крови разными разведениями краски: 1, 2 или 3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Для окраски одного мазка требуется 3-4 мл разведенной краски Романовского. Разведение краски производят в цилиндрах, причем краску приливают к воде и размешивают, но не наоборот. По мазку с лучшей окраской устанавливают титр краски и время окрашивания; этим титром пользуются для окрашивания препаратов крови.

Окраска мазков крови по Романовскому

Высушенные на воздухе и надписанные мазки фиксируют одним из указанных выше фиксаторов, кладут на мостики и после высыхания фиксатора покрывают на 20-25 минут разведенной по титру краской Романовского. Краску сливают, а мазки смывают водой и высушивают.

Окраска мазков крови по Нохту

Для окраски препаратов по этому методу готовят краску азур-эозин: 1 г сухой краски азур II растворяют в 1 л дистиллированной воды и 1 г водного эозина растворяют в 1 л дистиллированной воды. Растворы хранят отдельно в темном месте.

Для окраски используют смесь, состоящую из 0,5 мл раствора азура, 0,5 мл раствора эозина и 3 мл дистиллированной воды.

На фиксированный и высушенный мазок крови наливают на 20-30 минут азур-эозин, затем краску смывают: водой и высушивают мазки.

Окраска мазков крови по Лейшману

Для окраски препаратов необходима краска Лейшмана, которая продается в готовом виде, и дистиллированная вода нейтральной реакции.

На нефиксированный мазок наливают 15-20 капель, краски Лейшмана (благодаря наличию спирта в краске; происходит одновременная фиксация препарата) на 2 минуты. Пипеткой прибавляют 30-40 капель дистиллированной воды нейтральной реакции, производят смешение реактива с водой, красят 4-5 минут. Мазок промывают водой и высушивают на воздухе.

Окраска мазков крови по Крюкову-Папенгейму

Для окраски препаратов надо иметь: 1) фиксатор Май-Грюнвальда, 2) дистиллированную воду нейтральной реакции и 3) разведенную по титру краску Романовского. Для приготовления фиксатора Май-Грюнвальда 0,5 г краски (эозиновокислой метиленовой синьки) растворяют в 200 мл метилового спирта; фиксатор имеется также в готовом виде.

Читайте также:  Латентный сахарный диабет что это такое

На нефиксированный мазок на 3 минуты наливают 10-15 капель фиксатора Май-Грюнвальда. Не сливая фиксатор, на мазок наливают 10-15 капель дистиллированной воды нейтральной реакции и выдерживают одну минуту, затем фиксатор с водой сливают и на препарат наливают разведенную по титру краску Романовского. Через 15-20 минут препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Окраска толстой капли крови

Толстые капли крови не фиксируют. Предметные стекла с хорошо просушенными толстыми каплями располагают па мостике на некотором расстоянии одно от другого и на 8-10 минут наливают на них краску Романовского (того же разведения, что и для окраски мазков крови). Происходит выщелачивание эритроцитов. Затем краску сливают и на препараты наливают новую порцию разведенной краски Романовского на 20-30 минут. Затем осторожно, чтобы не смыть, капли, предметные стекла ополаскивают водой и высушивают.

Показания: подозрение на малярию.

1. Иглу – копьё (скарификатор)

2. Ватные шарики.

4. Предметные стёкла.

6. Стерильные перчатки.

8.Лоток для использованного материала.

1. Установить доверительные отношения с пациентом, объяснить цель и ход исследования, получить согласие на проведение манипуляции.

2. Пациента усадить.

1. Выполнить гигиеническую обработку рук, надеть перчатки.

2. Обработать место прокола стерильным ватным шариком, смоченным в спирте.

3. Проколоть иглой – копьём кожу

четвертого пальца или мочки уха.

4. Стереть первую каплю крови сухим ватным шариком.

5. К следующей капле крови прикасаются стеклом в 2 местах на небольшом расстоянии друг от друга, не касаясь пальца.

6. Затем, углом другого стекла или стеклянной палочкой обе капли соединяют и размазывают до диаметра 10-15 мм.

Последующий уход: не требуется.

Возможные осложнения: нет.

1. Забор крови желательно проводить в период повышения температуры в начале заболевания и на фоне нормальной температуры в конце заболевания для контроля эффективности лечения.

2. Обычно для каждого пациента готовят 2-3 толстые капли одновременно и 1 мазок крови.

2. Препарат «толстой капли» высушивают при комнатной температуре и окрашивают по методу Романовского – Гимзе.

2.Если при взятии крови, кровь идёт

плохо, руку опустить вниз.

Выдавливать кровь из пальца

нельзя, т.к. может выступать лимфа,

а это повлияет на результаты

— объяснить пациенту значение исследования.

— предупредить пациента, что будет небольшой укол. Попросить потерпеть, не напрягать кисть.

Забор рвотных масс на посев

Показания: пищевые токсикоинфекции, холера.

1.Широкогорлые стерильные флаконы (банки).

2. металлическую ложку или пипетку

3. Плотную бумагу или целлофан.

4. Клеёнчатый фартук.

Подготовка пациента: не требуется.

1. Выполнить гигиеническую обработку рук, надеть перчатки.

2. Рвотные массы собрать в стерильные банки или широкогорлые флаконы в количестве 50-100 (мл)

2. Отверстие банки или флакона

закрыть целлофаном или плотной вощеной бумагой. Материал направить в лабораторию.

Последующий уход: если у пациента продолжается рвота, оказать помощь, после прекращения рвоты пациенту дать прополоскать рот, умыть, переодеть.

Возможные осложнения: распространение инфекции.

Примечания: аналогичным способом можно собрать промывные воды желудка, но промывание следует производить кипяченой водой без применения антисептических

средств, обладающих губительным действием на микробы.

— рассказать пациенту о значении исследования.

— пациента успокоить, следить за его состоянием.

— забор производится специальной металлической ложкой или пипеткой с резиновым грушевидным баллончиком на конце.

Забор крови на серологическое исследование

Показания: подозрение на брюшной тиф, вирусные гепатиты, ВИЧ-инфекцию и другие инфекционные заболевания.

1.Центрифужные пробирки в штативе.

2.Инъекционную иглу с широким просветом.

3.Стерильные марлевые шарики, салфетки, бинт.

6. Стерильный лоток

7. Флакон с 70% спиртом

8. Венозный жгут

9. Клеёнчатую подушку, обёрнутую пелёнкой.

10.Ёмкость с дезинфицирующим раствором.

11.Лоток для использованного материала.

1.Установить доверительные отношения с пациентом.

2.Объяснить пациенту цель и ход процедуры, получить согласие.

3.Помочь пациенту занять удобное положение (сидя или лёжа).

4.Под локоть пациента подложить клеёнчатую подушку, обёрнутую стерильной салфеткой или пелёнкой.

1.Обработать руки на гигиеническом уровне, надеть стерильные перчатки.

2.Подготовить стерильный лоток со стерильной иглой для венепункции и стерильной салфеткой, штатив с центрифужными пробирками.

3.Осмотреть и пропальпировать вену.

4.Исследовать пульс на лучевой артерии.

5.Наложить жгут на плечо пациента, обёрнутое стерильной пелёнкой.

6.Повторно исследовать пульс.

7.Попросить пациента работать кулаком.

8.Дважды обработать кожу внутренней поверхности локтевого сгиба спиртом в направлении от периферии к центру (сначала большую поверхность, затем только место венепункции).

9.Ниже места предстоящей венепункции положить стерильную марлевую салфетку.

10.В правую руку взять иглу для венепункции, попросить пациента зажать кулак.

11.Большим пальцем левой руки зафиксировать вену, правой рукой выполнить венепункцию, левой рукой подставить под канюлю иглы пробирку и набрать необходимое количество крови.

12. Поставить пробирку в штатив.

13. Попросить пациента разжать кулак, снять жгут и приложив к месту венепункции стерильный марлевый шарик, смоченный спиртом, извлечь иглу.

14.Попросить пациента согнуть руку в локтевом суставе или наложить давящую повязку.

1.Весь использованный инструментарий подвергнуть дезинфекции.

3.Вымыть и высушить руки.

4.Оформить направление в лабораторию. Доставить пробирку с кровью в лабораторию.

Возможные осложнения: гематома, инфицирование.

1.В дальнейшем, кровь

центрифугируется, из неё готовится

сыворотка и проводится реакция агглютинации с готовыми диагностикумами различных заболеваний.

2. Недостаток метода в том, что антитела появляются на 5-7 день болезни, преимущества — точный и используется для контроля за эффективностью лечения.

3.При заборе крови на ВИЧ – инфекцию используется шприц- контейнер.

– выявление специфических антител к возбудителю заболевания или антигенов микроорганизма .

3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Паразитологическая диагностика малярии

Дата введения 2001-01-01

1. Методические указания подготовлены сотрудниками Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского Московской медицинской Академии им. И.М.Сеченова Минздрава России (к.м.н. Рабинович С.А., к.б.н. Кукина И.В., Mа. ская* Е.В., к.м.н. Морозов Е.Н.) и Федерального центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора Минздрава России (к.б.н. Цыбина Т.Н., Сыскова Т.Г.).
________________
* Брак оригинала. — Примечание изготовителя базы данных.

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 19 октября 2000 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения и нормативные ссылки

1. Область применения и нормативные ссылки

Паразитологическую лабораторную диагностику малярии проводят клинико-диагностические лаборатории лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) системы Минздрава, ведомственных учреждений, а также другие лаборатории, независимо от принадлежности и форм собственности (НИИ, вузов, Минобороны, УВД, частных клиник и т.д.), имеющие лицензию и аккредитованные в системе госстандарта и госсанэпиднадзора в установленном порядке.

Органы и учреждения государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации организуют и проводят эпидемиологический надзор за малярией, частью которого является:

контроль за уровнем лабораторной диагностики малярии в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений и других ведомств (в т.ч. исследования: 1) контрольные — не менее 10% препаратов крови, от числа отрицательных; 2) обязательные — 100% сомнительных и положительных препаратов крови с целью подтверждения лабораторного диагноза малярии);

обследование населения в очагах малярии, обследование населения по эпидпоказаниям и с консультативной целью.

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие нормативно-методические и правовые документы.

Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" (30 марта 1999, N 52-ФЗ).

"Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" (22 июля 1993, N 5487-1).

Санитарные правила и нормы 3.2.569-96* "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".
_______________
* Действуют СанПиН 3.2.1333-03. — Примечание изготовителя базы данных.

Санитарные правила 3.1/3.2.558-96* "Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний".
_______________
* Действуют СП 3.1/3.2.1379-03. — Примечание изготовителя базы данных.

Санитарные правила 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности и гельминтами".

Читайте также:  Удален левый яичник последствия

2. Общие положения

Возможность завоза малярии на территорию Российской Федерации, появление вторичных от завозных и местных случаев заболевания требуют своевременной лабораторной диагностики, необходимой для адекватного лечения и рационального проведения противоэпидемических мероприятий.

Малярию человека вызывают 4 вида паразитических простейших рода Plasmodium: Р. falciparum — возбудитель тропической малярии, Р. vivax — трехдневной малярии, Р. ovale — малярии типа трехдневной, Р. malariae — четырехдневной малярии. Неспецифические клинические проявления малярии, преимущественно в первые дни болезни, при наличии ряда объективных показателей эпидемиологического характера: географический анамнез (пребывание на территории стран с тропическим и субтропическим климатом) и клинического характера: лихорадочное состояние неясной этиологии, анемия, увеличение селезенки и ряд других — обязывают врачей лечебно-профилактических учреждений заподозрить малярию.

Безусловным подтверждением диагноза служит обнаружение малярийного паразита при микроскопическом исследовании крови. Особое значение имеет раннее выявление возбудителя тропической малярии, при несвоевременной диагностике которой возможен летальный исход. Определение вида паразита служит основанием для выбора рациональной терапии и правильной организации противоэпидемических мероприятий.

3. Характеристика развития малярийного паразита в эритроцитах

Проявления малярии обусловлены развитием паразита в эритроците — так называемой эритроцитарной шизогонией. В процессе эритроцитарной шизогонии образуются бесполые и половые формы паразита.

Бесполые формы за период времени, характерный для каждого вида паразита, проходят в эритроцитах ряд последовательных возрастных стадий своего развития, строение которых (морфология) и их окрашиваемость (тинкториальные свойства) хорошо различимы в "тонком мазке" крови. Трофозоиты — одноядерные растущие стадии: кольцевидные, развивающиеся (амебовидные, полувзрослые) и зрелые. Шизонты — делящиеся стадии: развивающиеся (незрелые), с последовательным делением ядер и общей цитоплазмой и зрелые, представляющие скопление дочерних клеток мерозоитов с обособленными ядрами и цитоплазмой. В динамике эритроцитарная шизогония в общем виде протекает следующим образом. Мерозоит, внедрившийся в эритроцит, быстро увеличивается в размере, в цитоплазме появляется пищеварительная вакуоль и образуется — кольцевидный трофозоит. На этой стадии цитоплазма имеет вид узкого ободка, огибающего пищеварительную вакуоль, ядро сравнительно мелкое, компактное с трудно различимой структурой хроматина, оттеснено к одному из полюсов клетки. По мере роста паразита увеличиваются его размеры, количество цитоплазмы нарастает: ядро становится более крупным, менее компактным. В цитоплазме могут появиться асимметричные утолщения, различающиеся по форме и числу, псевдоподии — образуется амебовидный трофозоит. В дальнейшем у развивающегося трофозоита постепенно исчезает вакуоль, продолжает увеличиваться ядро и количество цитоплазмы — образуется зрелый трофозоит. Зрелый трофозоит — округлая или несколько вытянутая клетка с относительно рыхлым ядром, правильной или несколько вытянутой формы, занимающая весь или часть пораженного эритроцита. Затем наступает стадия шизонта, начинается попарное деление ядер, образуется развивающийся (незрелый) шизонт. По окончании деления ядер одномоментно делится цитоплазма, обособляясь вокруг каждого из дочерних ядер — образуется зрелый шизонт, состоящий из мерозоитов; их число, размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента характерны для каждого вида плазмодиев (см. таблицы). При отсутствии или неэффективном лечении мерозоиты внедряются в интактные эритроциты, и цикл вновь повторяется с присущей для каждого вида плазмодиев продолжительностью развития одной генерации. У Р. falciparum, P. vivax, P. ovale — 48 ч, Р. malariae — 72 ч.

В процессе роста паразита в его цитоплазме появляется малярийный пигмент — продукт метаболизма гемоглобина, представляющий собой включения от едва заметных мелких зерен и гранул до относительно более крупных, неправильной формы, от золотисто-коричневого до черного цвета. Количество пигмента, размеры его частиц и распределение в цитоплазме паразита меняются по мере его перехода в последовательные стадии развития.

У части трофозоитов деления ядер не происходит и они дифференцируются в половые формы, гаметоциты — женские (макрогаметоциты) и мужские (микрогаметоциты). Мужские и женские гаметоциты различаются между собой по морфологии, в первую очередь по структуре ядра, характеру и окраске цитоплазмы. В отличие от бесполых форм гаметоциты не имеют выраженной вакуоли, характеризуются значительно более обильным и грубым пигментом. Округлая форма присуща гаметоцитам Р. vivax, Р. ovale и Р. malariae, удлиненная серповидная (полулуния) — Р. falciparum. Гаметоцитов образуется меньше, чем бесполых форм. При этом женских гаметоцитов в 3-5 раз больше, чем мужских, что затрудняет выявление последних. Гаметоциты Р. vivax, Р. ovale, P. malariae значительно отличаются от гаметоцитов Р. falciparum по срокам созревания, появления в периферической крови и сохранения способности заражать переносчика (самок комара Р. anopheles).

Р. vivax, Р. ovale и Р. malariae развиваются в эритроцитах, циркулирующих в периферической крови. Развитие Р. falciparum происходит в синусах селезенки и мелких капиллярах внутренних органов в связи с адгезией пораженных эритроцитов к стенкам таких капилляров. В периферической крови обнаруживаются, преимущественно при неосложненном течении, только самые молодые стадии — кольцевидные трофозоиты. Их число очень быстро нарастает, поэтому при однократном исследовании периферической крови в начале болезни можно получить неправильное представление об истинном числе паразитов. При осложненном течении в периферической крови могут быть обнаружены более зрелые возрастные стадии паразита и гаметоциты в связи с нарушением сосудистого тонуса.

При оценке результатов исследования препаратов крови, наряду с типичной морфологией возбудителя, необходимо учитывать ряд особенностей, характеризующих паразитологическое развитие инфекции собственно и привходящих воздействий (предшествовавшее применение противомалярийных препаратов, неправильное приготовление и окраска препаратов крови).

4. Принцип метода паразитологической диагностики малярии

Паразитологическая диагностика малярии основана на обнаружении бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Для обнаружения плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом "тонкого мазка" и "толстой капли", окрашенные по Романовскому-Гимза. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.

Основной метод — "толстая капля". Благодаря распределению относительно большего объема крови на меньшей площади, за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30-40 раз большее, чем в "тонком мазке", что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Начинать надо всегда с просмотра "толстой капли".

Чувствительность метода "толстой капли" такова, что при просмотре 100-150 полей зрения можно обнаружить около 8 паразитов в 1 мкл крови. Концентрация исследуемой крови на ограниченной площади приводит к многослойному расположению эритроцитов. Для того чтобы паразиты были видимы, "толстую каплю" окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов, и паразиты подвергаются деформации. Несмотря на определенную специфичность, такая деформация иногда может препятствовать идентификации вида паразита. Ограничиться просмотром "толстой капли" можно только, если вид паразита был первоначально установлен. "Толстая капля" относительно быстро позволяет выявить и других паразитов крови: трипаносом, микрофилярий, спирохет, бабезий и др. Отрицательный паразитологический результат изучения "толстой капли", но повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов позволяет предположить перенесенную недавно малярию (при отсутствии соответствующих анамнестических данных), обнаружение повышенного содержания лейкоцитов, их видовой состав, а также повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов, позволяют предположить иное заболевание, не связанное с малярией.

В "тонком мазке", фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности как пораженного эритроцита, так и присущие данному виду паразита. Большое значение для дифференциального диагноза имеет характер изменения пораженных эритроцитов. "Тонкий мазок" крови делают в дополнение к "толстой капле". В тех случаях, когда вид возбудителя в очаге установлен, для эпиднадзора за очагом можно ограничиться методом "толстой капли".

5. Необходимые реактивы и оборудование

1. Этиловый спирт 96°.

2. Азур-эозин по Романовскому-Гимза (промышленный маточный раствор или сухая краска).

3. Метиленовый синий.

4. Этиловый эфир.

6. Тетраборат натрия (бура).

7. Калий фосфат однозамещенный безводный — KH PO .

Ссылка на основную публикацию
Adblock detector